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生化試劑盒

羧酸酯酶(CarE)試劑盒-可見分光光度法
恒遠生物生化試劑盒應用領域廣泛,涉及酶類、氧化應激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標儀,分光光度計和熒光酶標儀。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測服務和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優(yōu)良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質的服務

中文名稱

羧酸酯酶(CarE)試劑盒-可見分光光度法

規(guī)格 48樣
貨號

L-736-SH

價格 ¥300
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法

可見分光光度法

貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務員獲取
文獻 咨詢我司業(yè)務員獲取

    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

 

測定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固顯色;在450 nm光吸收增加速率,計算CarE活性。

自備儀器和用品

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

 

試劑組成和配

試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體30mL×2瓶, 4℃保存;

試劑三:粉劑×2支, 4℃保存,臨用前取1支試劑三,加1.2ml無水乙醇充分溶解;

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前取1支試劑四,加少量試劑二溶解;

工作液配制:臨用前配制,向1瓶試劑二中,加入溶解后的試劑三和試劑四各1支,充分溶解,過濾,4℃避光保存,可用1周。

 

樣本的前處理

1、細菌、細胞樣品制備

收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);12000g 4℃離心30min,取上清液待測。

2、組織:按照組織質量(g)試劑一(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿;12000g 4離心30min,取上清液待測。

3、液體:直接測定。

 

測定步驟

1. 分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到450 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入5μL蒸餾水和1000μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。△A空白管=A2-A1

4. 測定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入5μL上清液和1000μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。△A測定管=A4-A3

注意:空白管只需測定一次。

 

CarE活性計算公式:

1 組織中CarE活性

(1) 按照蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。

CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;V樣:加入上清液體積,0.005 mLT:反應時間,3min。V反總:1.005mL;蛋白質濃度需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

(2) 按照樣品質量計算

單位的定義:每g組織在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

= 67×(△A測定管-△A空白管)÷W

V樣總:上清液總體積,1 mLV樣:加入上清液體積(mL),0.005 mLV反總:1.005mL;W:樣品質量(g);T:反應時間(min),3min。

2 細菌或細胞中CarE活性

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細胞密度(104 cell/mL÷T

= 67×(△A測定管-△A空白管細胞密度(104 cell/mL

V總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;V反總:1.005mL T:反應時間(min),3min。

3. 液體中CarE活性

單位的定義:每毫升樣品在37反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V÷T

= 67×(△A測定管-△A空白管)

V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;V反總:1.005mL;T:反應時間(min),3min。

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